طراحی آزمون زنجیرهای پلی مراز (pcr) جهت تشخیص مولکولی سریع neisseria meningitidis

نویسندگان

زکیه قدیمی

z. ghadimi محمد سلیمانی

m. soleimani امیر حسین محسنی

ah. mohseni کیوان مجیدزاده

k. majidzadeh-a - (*corresponding author), aja university of medical sciences, tasnim biotechnology of research center (tbrc), tehran, iran.ایران، تهران، دانشگاه علوم پزشکی آجا، مرکز تحقیقات زیست فناوری تسنیم (*نویسنده مسئول)

چکیده

سابقه و هدف: نایسریا مننژیتیدیس پاتوژن اختصاصی انسان و دومین عامل شایع مننژیت در جهان است. جهت شناسایی این باکتری از آزمون های سنتی مانند کشت مایع نخاعی استفاده می شود ولی از معایب این روش ها وقت گیر بودن است. هدف این مطالعه، تشخیص سریع این باکتری به روش واکنش زنجیره ای پلی مراز (pcr) با استفاده از ژن crga است.   مواد و روش ها: ژن اختصاصی، حفاظت شده و دارای ارزش تشخیصی crga جهت طراحی پرایمر انتخاب گردید. پرایمرهای اختصاصی برای این ژن طراحی شد. واکنش pcr توسط این پرایمرها بر روی dna ژنومیک نایسریا مننژیتیدیس راه اندازی شد. جهت ساخت کنترل مثبت، محصول pcr در وکتور ptz57r/t کلون گردید. جهت تایید حضور ژن هدف در وکتور، روش هضم آنزیمی و توالی یابی انجام شد. به منظور تعیین حساسیت واکنش، از پلاسمید کنترل مثبت فوق با غلظت اولیه 70 نانوگرم رقت 5-10- 1-10 تهیه گردید و واکنش pcr ژن هدف بر روی همه رقت های پلاسمید انجام گرفت. تعیین ویژگی واکنش، بر روی 11 ژنوم از باکتری های مختلف انجام شد.   یافته ها: نتایج pcr ژن crga باند مورد انتظار 500 جفت باز را نشان داد. نتایج حاصل از هضم آنزیمی و توالی یابی، حضور ژن هدف را در وکتور تایید کرد. حد نهایی تشخیص این روش برای ژن crg a ، 70 پیکوگرم به دست آمد. نتایج تعیین ویژگی مشخص نمود که پرایمر طراحی شده با هیچ یک از باکتری های دیگر واکنش تکثیر غیر اختصاصی ندارد.   بحث و نتیجه گیری: روش pcr طراحی شده در این تحقیق از دقت و حساسیت لازم برخوردار است به طوری که از این روش می توان به عنوان یک آزمون قابل اعتماد، جهت تشخیص سریع باکتری نایسریا مننژیتیدیس استفاده نمود.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

طراحی آزمون زنجیرهای پلی مراز (PCR) جهت تشخیص مولکولی سریع Neisseria meningitidis

  سابقه و هدف: نایسریا مننژیتیدیس پاتوژن اختصاصی انسان و دومین عامل شایع مننژیت در جهان است. جهت شناسایی این باکتری از آزمون ‌ های سنتی مانند کشت مایع نخاعی استفاده می ‌ شود ولی از معایب این روش ‌ ها وقت گیر بودن است. هدف این مطالعه، تشخیص سریع این باکتری به روش واکنش زنجیره ‌ ای پلی مراز (PCR) با استفاده از ژن CrgA است.   مواد و روش ‌ ها: ژن اختصاصی، حفاظت شده و دارای ارزش تشخیصی CrgA جهت طراح...

متن کامل

طراحی واکنش زنجیره ای پلی مراز(PCR) جهت تشخیص مولکولی باکتری هموفیلوس آنفلوانزا

مقدمه: هموفیلوس آنفلوانزا مهم ترین عامل بیماری مننژیت در نوزادان و کودکان زیر 5 سال است. از این رو تشخیص سریع این عامل ضروری است. مطالعات نشان داده است که روش های مولکولی، تست های اختصاصی برای تشخیص سریع این عامل هستند. هدف این مطالعه، طراحی روش PCR جهت تشخیص سریع باکتری هموفیلوس آنفلوانزا بود. مواد و روش ها: در این مطالعه پرایمر های اختصاصی بر اساس ژن ompp6 طراحی و واکنش PCR راه اندازی شد. جه...

متن کامل

تشخیص سریع باکتریهای مولد بیماری تب مالت با استفاده از واکنش زنجیرهای پلی مراز

سابقه و هدف: تب مالت یک بیماری مشترک بین انسان و حیوانات مختلف است که توسط گونههای بروسلا ایجاد میشود. اگرچه این بیماری بهندرت کشنده میباشد، اما در صورت عدم تشخیص سریع و مناسب، در همه گیریها و استفاده عمدی در جنگهای بیولوژیک، صدمات شدیدی به تسهیلات مراقبت پزشکی وارد میکند. با توجه به محدودیتهایی مثل زمان طولانی، دقت پایین، حساسیت کم و نتایج مثبت و منفی کاذب در روشهای تشخیص سنتی بروسلاها، هدف از...

متن کامل

تشخیص سریع باکتریهای مولد بیماری تب مالت با استفاده از واکنش زنجیرهای پلی مراز

سابقه و هدف: تب مالت یک بیماری مشترک بین انسان و حیوانات مختلف است که توسط گونههای بروسلا ایجاد میشود. اگرچه این بیماری بهندرت کشنده میباشد، اما در صورت عدم تشخیص سریع و مناسب، در همه گیریها و استفاده عمدی در جنگهای بیولوژیک، صدمات شدیدی به تسهیلات مراقبت پزشکی وارد میکند. با توجه به محدودیتهایی مثل زمان طولانی، دقت پایین، حساسیت کم و نتایج مثبت و منفی کاذب در روشهای تشخیص سنتی بروسلاها، هدف از...

متن کامل

طراحی واکنش زنجیرهای پلیمراز برای تشخیص مولکولی سالمونلا تیفی

سابقه و هدف: سالمونلا انتریکا سروتایپ تیفی، باکتری مولد بیماری تب تیفوئید میباشد که سالانه بیش از 16 میلیون نفر در جهان به آن مبتلا میشوند و حدود 600 هزار نفر نیز در اثر آن می میرند. روشهای کلاسیک تشخیص این بیماری اغلب وقتگیر میباشند و از حساسیت کافی برخوردار نیستند. هدف این مطالعه، ارائهی نوعی روش مولکولی واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR: Polymerase Chain Reaction) برای تشخیص سریع و انجام اقدامهای ...

متن کامل

طراحی واکنش زنجیره ای پلی مراز بهبودیافته جهت تشخیص مولکولی باکتری استرپتوکوکوس نیومونیا

زمینه و هدف: باکتری استرپتوکوکوس نیومونیا عامل مننژیت باکتریایی و یک عامل مهم مرگ و میر در کودکان و افراد سالخورده است. کنترل این بیماری نیز وابسته به تشخیص سریع باکتری می باشد. روش های تشخیص این باکتری شامل رنگ آمیزی گرم، کشت و تست های سرولوژیکی است. این روش ها وقت گیر و در اثر مصرف آنتی بیوتیک منجر به نتایج منفی کاذب می شوند. در حال حاضر، روش های مولکولی مانند pcr به صورت روزانه برای تشخیص عو...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
annals of military and health science research

جلد ۱۰، شماره ۱، صفحات ۱۰-۱۶

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023